Phosphatasen, weitverbreitete Gruppe von Hydrolasen, die die Spaltung von Phosphomonoestern (Esterasen) katalysieren. Die P. kommen vor allem in Leber, Pankreas, im Verdauungstrakt sowie in Mikroorganismen, z. T. als Isoenzyme oder multiple Formen, vor. Sie sind meist dimere Proteine und enthalten im aktiven Zentrum einen essentiellen Serinrest. Die Unterteilung der P. erfolgt nach ihrem pH-Optimum in saure P. (pH-Optimum bis 5) mit den P. aus Leber (M_r 16000), Erythrocyten (M_r 10000) und Prostata (M_r 102000) als wichtigsten Vertretern und in alkalische P. (pH-Optimum 7 bis 8), die insbesondere in der Dünndarmschleimhaut (M_r 140000) und in der Plazenta (M_r 120000) vorkommen. Die aus Escherichia coli stammende alkalische P. besteht aus zwei Ketten mit einer M_r von je 43000. Für die Wirksamkeit der alkalischen P. sind zwei Zinkatome je Untereinheit sowie die Gegenwart von Mg²⁺-Ionen erforderlich. Die P. werden durch unterschiedliche Verbindungen gehemmt. Sie sind auch an reversiblen Phosphorylierungen von Proteinen (Enzymen) bei der Regulation ihrer Aktivität beteiligt (Phosphoprotein-P.). Diagnostische Bedeutung haben die Bestimmung der sauren P. im Serum bei Verdacht auf Prostatakrebs und die der alkalischen P. insbesondere bei Verdacht auf Knochen-, Leber- und Gallenblasenerkrankungen (z. B. Knochentumoren, Hepatitis und Verschlußikterus), bei denen die Serumproteaseaktivitäten um ein Vielfaches erhöht sind. Die alkalische P. dient als Markerenzym bei Enzymimmunoassays.

Zu den P. gehören auch die Nucleotidasen.